In der Volksmedizin wurde Rotklee bereits im frühen Mittelalter bei Hildegard von Bingen eingesetzt. Wichtige Inhaltsstoffe des Rotklees sind unter anderem Flavonoide, Isoflavone und Gerbstoffe. Flavonoide besitzen krampflösende und schleimlösende Eigenschaften und finden bei Atemwegserkrankungen und Keuchhusten Verwendung. Isoflavone haben einen östrogene und antiöstrogene Effekt und können bei Klimakterium angewendet werden.